Компанией Ideal Pharma Peptide проведен хроматографический анализ водного экстракта образцов жевательной резинки с целью идентификации и количественного определения входящего в ее состав пептида IPH AGAG.
1 Методы исследования
1.1 Объекты исследования
1.1.1 Описание
Единичное изделие представляет собой шарик, покрытый оболочкой, массой
1 г и диаметром 11,5 мм.
1.1.2 Подготовка проб
Шарик раскатывали на подложке из фольги и полученную массу количественно переносили в пробирку Vacuette. Прибавляли 5 мл воды и экстрагировали на аппарате для встряхивания в течение 15 минут при скорости 400 колебаний/мин. Затем пробу центрифугировали при скорости 4 000об/мин в течение 10 минут, экстракт отделяли и вводили в хроматограф. Всего для анализа было подготовлено 3 пробы.
2 Хроматографический анализ
Анализ выполнен методом ультраэффективной жидкостной хроматографии (УЭЖХ) с применением следующего оборудования:
– Хроматограф Acquity UPLC I-class с диодно-матричным спектрофотометрическим (СФ) детектором (Waters, США)
2.1 Условия хроматографирования
Таблица 1.
| Колонка | BEH C18 (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм |
| Подвижная фаза | 0,05% раствор трифторуксусной кислоты в воде |
| Режим хроматографического элюирования | Изократический |
| Скорость потока элюента | 0,2 мл/мин |
| Температура термостата колонки | 40 С |
| Объем пробы | 5 мкл |
| Рабочая длина волны УФ-детектора | 210 нм |
Количественные оценки произведены методом внешнего стандарта. В качестве стандартного образца использовали водный раствор субстанции пептида IPH AGAG, с концентрацией 10 мкг/мл.
Содержание пептида IPH AGAG в одной жевательной резинке массой 1 г (Х) в мкг вычисляли по формуле):
где S и S0 – площади пиков пептида IPH AGAG на хроматограммах растворов испытуемого и стандартного образцов соответственно;
С0 – концентрация раствора стандартного образца в мкг/мл.
Числовой коэффициент 5 – объем экстракта в мл.
3 Результаты исследования
Данные количественного анализа представлены в таблице.
Таблица 2. Содержание пептида IPH AGAG в жевательной резинке
| Номер пробы | Содержание пептида IPH AGAG (мкг/г) |
| 1 | 65,5 (33 %) |
| 2 | 44,0 (22 %) |
| 3 | 42,0 (21 %) |
| Среднее значение: 50,5 (25%) |
Рисунок 1 – Хроматограмма раствора стандартного образца пептида AGAG с концентрацией 10 мкг/мл
Рисунок 2 – Хроматограмма экстракта жевательной резинки (Проба № 2)
